环亚集团·AG88推出了一种基于探针法荧光定量PCR原理的检测试剂盒，具有多项显著特点：

产品特点

1. 即开即用，用户仅需提供样品DNA模板。
2. 引物及其他组分经过精心优化，具备高灵敏度。
3. 包含阳性对照，帮助用户有效区分假阴性结果。
4. 特异性强，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的保守区域，避免与其他生物样本的DNA发生交叉反应。
5. 可用于定性和定量检测，定量检测时的线性范围覆盖至少5个数量级。
6. 一套产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 本产品仅限于科研使用。

使用方法

一、样本准备

采用自选方法提取纯化样品DNA，本试剂盒与市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。

二、标准曲线样品稀释

注意：由于阳性对照浓度较高，稀释操作应在独立区域进行，以避免污染样品或其他试剂成分。
1. 标记6个离心管，分别标记为7，6，5，4，3，2。
2. 使用带芯枪头在每个管中加入45μL DEPC-H2O。
3. 在7号管中加入5μL阳性对照（1×10E8拷贝/μL），振荡1分钟，得到1×10E7拷贝/μL的标准曲线样品。
4. 更换枪头，在6号管中加入5μL来自上一步的稀释样品（1×10E7拷贝/μL），振荡1分钟，得到1×10E6拷贝/μL的标准曲线样品。
5. 重复上述操作，直到准备好6个不同稀释度的标准曲线样品。
如不需要制作标准曲线，可将阳性对照稀释到1×10E5拷贝/μL即可。

三、试剂配制

根据待检样品数量，准备N+2个qPCR管（N为待检样品数，额外加1个阴性对照和6个阳性对照），然后向每个PCR管中加入所需成分，具体信息可参阅详细说明书。

四、添加模板

向qPCR管中分别加入2μL模板，按如下顺序加样：阴性对照（DEPC-H2O）、待测样品模板、阳性对照。离心30秒后，立即进行扩增反应。

五、扩增反应

将PCR管放置于PCR扩增仪器的相应位置，进行扩增，具体扩增程序可参阅详细说明书。

六、结果分析

1. 如制作标准曲线，以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，并通过待测样品的Ct值推算样品DNA的浓度。
2. 如未制作标准曲线，可基于以下标准判断结果：阳性对照的Ct值应低于30，并展示明显的指数增长和典型S型曲线；阴性对照的Ct值应在38或无Ct值范围内，并无明显指数增长；样本检测结果若Ct值低于35，表明阳性；若在35-38之间，应复检，重复实验结果仍在该范围且有明显指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输与保存

请采用低温运输，储存于-20℃，有效期为一年。阳性对照需单独存放，避免污染其他试剂。

选择环亚集团·AG88，为您的生物医学研究提供高品质的检测解决方案。